C18 色谱柱是液相色谱中常用的一种固定相,下面是使用 C18 色谱柱的一些基本步骤:
1. 色谱柱的准备:在使用前,需要对色谱柱进行清洗和平衡。通常,可以使用色谱柱厂商推荐的溶剂或流动相进行清洗,并在清洗后使用流动相平衡色谱柱。平衡时间通常为 1-2 小时,直到基线稳定为止。
2. 流动相的选择:C18 色谱柱的分离效果主要取决于流动相的组成和比例。通常,流动相包括有机溶剂和水,可以根据样品的性质和分离需求选择合适的流动相。对于普通的反相色谱,常用的流动相组合包括甲醇-水、乙腈-水等。
3. 样品的准备:样品需要经过适当的预处理,使其能够在流动相中溶解,并去除可能对色谱柱造成污染的物质。对于含有机溶剂的样品,需要使用低浓度的有机溶剂进行稀释,以避免对色谱柱造成损坏。
4. 进样:将样品注入色谱柱,开始分离过程。进样量需要根据样品的浓度和分离需求进行调整,通常为几微升到几十微升。
5. 洗脱:样品进入色谱柱后,通过控制流动相的流速和比例,使样品在色谱柱中进行分离。不同的化合物在色谱柱中的保留时间不同,因此可以通过监测色谱峰的出现和消失来判断样品中不同化合物的存在。
6. 色谱柱的清洗和保养:在使用后,需要对色谱柱进行清洗和保养,以延长其寿命和保持其分离性能。通常,可以使用与清洗色谱柱相同的溶剂或流动相进行清洗,并在清洗后使用流动相平衡色谱柱。此外,还需要避免长时间停留在高压状态下,避免使用可能对色谱柱造成损坏的物质,如强酸、强碱等。
总之,C18 色谱柱是液相色谱中常用的一种固定相,使用前需要进行清洗和平衡,使用时需要选择合适的流动相和样品,并进行适当的预处理和进样,使用后需要进行清洗和保养。在使用过程中,需要注意色谱柱的压力和流量,
发布于: 2023-08-28