C18 液相色谱柱柱效测试是评估色谱柱分离性能的重要实验。下面是 C18 液相色谱柱柱效测试的基本步骤:
1. 选择适当的流动相:通常使用反相色谱法,选择水和有机溶剂(如甲醇、乙腈等)的混合物作为流动相,根据待测样品的性质和分离要求,调整流动相的比例和 pH 值。
2. 制备样品:将待测样品溶解在流动相中,使用微量进样器将样品注入色谱柱。
3. 设置色谱条件:设置适当的色谱条件,如流速、柱温、检测波长等。通常采用等度洗脱或梯度洗脱的方式,根据样品的复杂程度和分离要求选择合适的洗脱方式。
4. 记录色谱图:启动液相色谱系统,记录样品的色谱图。根据色谱图中的峰形、峰高、峰面积等参数,评估色谱柱的分离效率和柱效。
5. 计算柱效:根据色谱图中的峰宽和保留时间等参数,可以计算出色谱柱的理论塔板数(N)和理论塔板高度(H),从而评估色谱柱的柱效。通常要求色谱柱的理论塔板数至少达到 3000 以上,理论塔板高度在 1-3 毫米之间。
需要注意的是,C18 液相色谱柱柱效测试需要在一定的实验条件下进行,包括流动相的选择、样品的制备、色谱条件的设置等。同时,测试结果也受到仪器的稳定性、数据处理方法等因素的影响。因此,在进行 C18 液相色谱柱柱效测试时,需要严格控制实验条件,并采用合适的数据处理方法,以获得准确的测试结果。
发布于: 2023-08-28