C18 反相色谱柱是高效液相色谱（HPLC）中最常用的一种色谱柱，它的分离原理基于反相分配色谱的原理。

在反相分配色谱中，固定相是一种非极性的吸附剂，如 C18 硅胶，而流动相则是极性的溶剂，如甲醇、乙腈等。样品中的各个组分在流动相和固定相之间的分配系数不同，从而实现分离。

当样品流经 C18 反相色谱柱时，样品中的各个组分会与固定相上的 C18 硅胶相互作用，由于 C18 硅胶是非极性的，样品中的极性组分会更容易被固定相吸附，而非极性组分则会更容易被流动相带走。因此，极性组分在 C18 反相色谱柱中的保留时间会更长，而非极性组分则会更快地流出。

此外，C18 反相色谱柱还可以通过改变流动相的组成和 pH 值等参数，调节样品中各个组分与固定相之间的相互作用，从而实现更好的分离效果。例如，在酸性流动相中，弱碱性化合物的保留时间会延长，从而提高它们的分离效率。

总之，C18 反相色谱柱的分离原理是基于反相分配色谱的原理，通过样品中各个组分与固定相上的 C18 硅胶相互作用，实现不同组分的分离。通过改变流动相的组成和 pH 值等参数，可以调节样品中各个组分的保留时间和分离效率，从而实现更好的分离效果。