流动相被称为HPLC系统的生命线，它起着至关重要作用：将样品输送通过分离柱，然后输送至检测器以鉴定分离出的成分。

流动相通常很少是单一的溶剂，它是水与有机溶剂相组合制成，比如水与极性溶剂的缓冲液或有机溶剂按所需比例混合组成。常用的两种操作模式是：

        等度洗脱—在等度模式下，流动相的组成在整个分析过程中保持不变。即混合物中溶剂的比例是预先确定的，并且在分析过程中只使用这一种流动相溶剂。

        梯度洗脱—通过软件以预定模式通过分析运行改变组成，运行结束时溶剂的比例与初始比例不同。

        在进行色谱分析时，等度洗脱和梯度洗脱各有优势和劣势。使用不同溶剂混合物的目的是获得所需的流动相极性，以实现样品的完全混溶，并控制样品组分与固定相的相互作用，以在最短的时间内实现分离出的组分峰的所需分离度。

        为了达到所需的目标，流动相应具有以下基本功能：

        1、样品应完全溶于流动相。任何不溶的情况都会导致流量限制。注入系统之前，务必检查样品在流动相中的溶解度。

        2、流动相成分应该是无毒无害的。它们不应对操作员构成健康危害。

        3、流动相应对样品成分和固定相呈惰性。任何反应都可能导致形成不溶的悬浮液，从而导致色谱柱堵塞。色谱柱一旦堵塞的话会造成峰宽展，对色谱柱的使用寿命也有影响。

        一些肉眼无法看到的化学物质，也可能造成色谱柱的堵塞。因此可以在色谱柱前添加一个保护柱，截留导致色谱柱筛板堵塞、柱头塌陷和柱效下降的化学物质和颗粒物。

        恒谱生色谱保护柱的卡套中内含保护柱芯，柱芯内含有填料。这些填料的存在可以拦截样品中的一些强保留、强酸性和强碱性物质，防止它们对色谱柱内填料的污染和损坏。恒谱生保护柱死体积少，在保护色谱柱的同时，对比于其他保护柱，它能够大大减少柱外效应带来的谱带展宽；减少流路扩散，提高色谱柱分析灵敏度和分离度；更低的柱芯成本。因此使用液相色谱保护柱，可以对色谱柱进行保护，是保护色谱柱很好的方式。

        4、与检测器兼容性好，流动相在通过检测器时不应给出自己的响应。换句话说，检测器信号应仅反映样品成分的响应。但是，这不适用于对包含洗脱化合物的流动相的整体折射率变化做出响应的整体性质检测器，例如折射率检测器。

        5、粘度要低。因为高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。

        HPLC技术在不同领域中具有广阔的应用前景，越来越多的领域应用到各种HPLC技术。色谱操作员应该控制好操作条件（包括流动相的一致性）将确保结果的可重复性。