C18固相萃取小柱是一种常用的样品处理技术,主要用于分离和净化生物样品中的有机化合物。以下是C18固相萃取小柱的使用方法:
1. 准备工作:
a. 确保实验室环境干净整洁,通风良好。
b. 准备好所需的实验器材和试剂,如C18固相萃取小柱、离心机、涡旋振荡器、天平、移液器等。
c. 根据待测样品的量选择合适的C18固相萃取小柱规格。
2. 样品处理:
a. 首先将待测样品溶于适当的溶剂中,通常使用甲醇或乙腈作为溶剂。
b. 在涡旋振荡器上充分混匀样品溶液,然后通过离心机去除残留的气泡。
c. 用移液器将适量的样品溶液转移到C18固相萃取小柱上,注意不要超过小柱的容量。
d. 将C18固相萃取小柱放入离心机中,以适当的速度离心,使样品溶液充分渗透到小柱中。
3. 洗涤步骤:
a. 用适量的新鲜溶剂(如水或甲醇)冲洗C18固相萃取小柱,以去除多余的样品溶液。
b. 重复上述洗涤步骤,直到流出的溶剂无色清澈。
c. 将洗涤后的C18固相萃取小柱放在离心机中离心,以去除残留的溶剂。
4. 收集目标物质:
a. 从C18固相萃取小柱上切下一段合适长度的部分,将其插入滤纸或滤膜上。
b. 将滤纸或滤膜放入离心机中,加入适量的洗脱剂(如甲醇或乙腈),离心后收集滤纸上的洗脱液。
c. 重复上述操作,直到滤纸上的洗脱液颜色变浅或不再有明显的变化。
5. 分析目标物质:
a. 对收集到的洗脱液进行光谱分析,如紫外-可见光谱、红外光谱或质谱分析等。
b. 根据分析结果,确定待测样品中的有机化合物的种类和含量。
6. 废弃物处理:
a. 对于一次性使用的C18固相萃取小柱,在实验结束后应按照当地环保法规妥善处理。
b. 对于可重复使用的C18固相萃取小柱,在清洗并晾干后可以再次使用。
7. 注意事项:
a. 在整个实验过程中要保持良好的实验室习惯,避免交叉污染。
b. 不同类型的C18固相萃取小柱可能需要不同的洗脱条件,因此在实际操作时需根据具体情况调整实验步骤。
发布于: 2023-09-12