液相色谱柱是实验室中用于分离和纯化化合物的重要工具。然而,使用液相色谱柱时需要注意一些关键事项,以确保其性能和寿命。此外,保持良好的色谱柱性能可以提高分析结果的准确性和可靠性,这一点对于科研工作者来说,也是至关重要的。
1、流动相和样品的过滤
在注入液相色谱系统之前,所有流动相都应经过过滤,以避免流动相中的杂质对色谱柱造成污染。特别是当流动相中含有缓冲盐时,过滤更加重要。另外,所配制的样品试液在注入流路系统前也要过滤,以防止滤膜溶解而造成污染。要使用与流动相互溶的溶剂进行过滤。
2、样品的净化
如果样品中含有对色谱柱有损害的化学成分,如产生永久性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。这有助于保护色谱柱,延长其使用寿命。
3、柱压的控制
在液相色谱分析过程中,要避免突然打开或关闭阀门导致压力的快速变化,因为这可能会对色谱柱造成损害。当柱压过高时,应尽可能采用较小的流速。这样可以保护色谱柱,并确保分析结果的准确性。
4、温度和酸碱度的调节
温度和酸碱度是影响色谱柱性能和寿命的重要因素。温度过高会加速硅胶的溶解和填料的性质改变,从而降低柱效,改变峰形。因此,在使用过程中要注意控制温度,特别是在使用以硅胶为基质的色谱柱时。此外,还要注意流动相的酸碱度,确保其与色谱柱的pH适用范围相匹配。避免极端的pH条件可以保护色谱柱并延长其使用寿命。
5、及时的冲洗
每次使用完毕后,应立即用适当的溶剂清洗色谱柱,以避免残留物对柱子造成损害。开始试验前,也要了解柱中当前是何种溶剂,以避免溶剂不兼容的情况。通过正确的冲洗步骤可以确保色谱柱的性能稳定和延长其使用寿命。
6、保护柱的使用
为保护分析柱免受污染和损害,可以加装保护柱。保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“垃圾”,同时除去流动相和样品中的不溶物。因此,在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时,加装保护柱是必不可少的措施。建议根据具体实验条件和样品性质选择合适的保护柱,并定期更换。
发布于: 2023-12-11