一、 概述
鬼峰是液相色谱中最常出现的问题之一,在做液相色谱反相系统梯度分析时,有时会遇到仪器不进样,也有出峰的情况;同样的条件,有时出现异常色谱峰,这种峰神出鬼没,变幻莫测,所以被称为鬼峰。
鬼峰来源多种多样,其主要来源可分为以下2个方面:
(1)流动相、样品稀释液、仪器或是容器中存在杂质,当梯度开始时由于有机相比例不高,洗脱能力不强,杂质在色谱柱柱头富集,随着流动相比例变化,洗脱能力增强,富集的杂质被洗脱,从而形成鬼峰。
(2)流动相脱气不完全,残留气泡。空气在有机相和水中的溶解度不同,当水和有机相混合时,气泡就产生了。
鬼峰的危害:
1、污染仪器
2、对样品成分误判断
3、与目标峰重叠,影响分离度
4、增加工作量要做更多的验证工作去判定这个物质是否是目标物质
反相色谱梯度分析时,使用恒谱生鬼峰捕集柱能够去除溶剂包括有机溶剂中的杂质,对弱极性和非极性的有机杂质有强烈吸附,有效的消除污染物,减少鬼峰出现的几率,延长色谱柱和仪器的寿命。
二、 鬼峰搜集去除柱的安装
鬼峰捕集去除柱保存在纯甲醇中,使用前采用纯甲醇1ml/min流速冲洗20min(注意:不要连接色谱柱和检测器进行冲洗),冲洗好后卸下小柱,按照示意图安装位置,连接到混合器与进样器之间。(安装时注意进出方向)
下面实例表明,将恒谱生鬼峰去除小柱安装在混合器之后可以有效捕集流动相引进的杂质。
色谱条件:
色谱柱:USHA- C18 4.6*250mm 5um
流速:1.0ml/min 进样量:20ul 柱温:40度 检测波长:210nm
样品:高纯水 流动相A:高纯水 流动相B:乙腈
运行梯度:
时间(min) |
流动相A(%) |
流动相B(%) |
0 |
90 |
10 |
20 |
10 |
90 |
30 |
10 |
90 |
使用前
使用后
鬼峰来源:
1.仪器中的杂质
2.样品中的杂质
3.流动相中的杂质
4.进样口稀释液与流动相极性/PH相差太大
5.流动相残留气泡
6.仪器系统时间较久
其中主要来源于流动相和管路,如:有机相中污染物,水相中污染物,缓冲盐,流动相瓶和混合过程产生等等。